Malebela a mantlha bakeng sa ho lla ha litso tsa litso

Malebela a mantlha bakeng sa ho lla ha litso tsa litso

Lisele tsa ho tsoela pele metabolism ea tsona nakong ea mesebetsi e tloaelehileng, e hlokang ho nka litlhase tse fapaneng. Ha mocheso o theoha ka tlase -70 ° C, lipelaelo li khaotsa ho sebetsa. Ka hona, tikolohong e nang le mocheso o tlase haholo, lisele li ka emisa liketso tsa tsona tsa metabolic ebe li kenya boemo bo hlasimollang bo lumellang polokelo ea nako e telele.

1. Lisebelisoa tsa liteko

Lintho tse iqapetsoeng:

Moetso oa Setso sa mantlha

Serum (Fbs tse tloaelehileng / nbs)

Matlafatso ea ts'ebetso ea Workbench

Sterile Dimberyl sulfoxide (DMSso)

Sterile PBSSSSPHATE BUFFER TUBLE EA Salt

Sethunya sa pipola

Sethunya sa motlakase sa motlakase

Ho hlophisoa ha liteko

a) Ho hlophisoa ha tharollo ea freezing:

Lisele tse akaretsang: 55% Basium + 40% Bovine Serum (Fbs / nbs) + 5% DMSO

Lisele tsa Bohlokoa: 90% Bovine Serum (Fbs / NBS) + 10% DMSO

Ka kharebe ea Cryopression e lokiselitsoeng ho tse 15 tsa Centrifuge tube [sehlaheng sa ney] le boloka ho la 4 ° C bakeng sa ts'ebeliso ea 4 ° C bakeng sa ts'ebeliso ea 4 ° C bakeng sa ts'ebeliso ea 4 ° C bakeng sa ts'ebeliso e latelang.

(b) Ho lokisa lisele ho ba hoamisoa:

Pele o bata lisele, khetha lisele tse nang le boemo bo botle ba kholo le ho li nkela tse ncha tse ngata tse bohareng ba li-cepzing.

2. Ts'ebetso ea liteko

1. Shebella boleng ba lisele tse seng li le hoamisoa, tse ka bang 80% ~ 90%. Sebelisa sethunya sa pipette ho lakatsa semelo sa khale, eketsa serfira pbs ea ho hlatsoa lisele ka makhetlo a 1-2, le ho tlosa se-molaoli se setseng tikolohong ea setso.

2. Kenya chelete e lekaneng ea li-tristkin kapa lero la diepe ho lumella trypsin ho kenya lisele, 'me u li kenye letsoho ho incubator ho etsa tšilo ea lijo. Shebella boemo ba lisele tse tlasa microscope: Cytoplasm e khutlisetsoa 'me lisele ha li kopanele masene. Ntlheng ena, eketsa tharollo ea ho emisa ho emisa ts'ebetso ea tšilafalo.

3. Budble lisele tse nang le ntlha ea ho emisoa le ho emisoa ka sell le centrifoge seleng e emisitsoeng ka 1000 RPM metsotso e 3-5 bakeng sa metsotso e 3-5.

Lahla matla a matla a matla, ho eketsa tharollo ea ho ba freezing, 'me ka bonolo u etelletse ka hanyane ho etsa hore lisele li bale ka mokhoa o tšoanang. Fetola molumo oa sell ka li-cryopressivation ho etsa Dentity 5 × 106 / ML ~ 1 × 107 / ML.

4. Sebelisa sethunya sa pipette ho arola li-hubege tsa li-cryogenic ho ea ka bokhoni bo lebelletsoeng, 'me u sebelise mochini o ikemetseng ho odisa le tiiso.

5. Lenaneo le fetoletsoeng la klitleliloeng ke lebelo la -1 ° C ho ea -2 ° C / Min, mme lisele le mela e ka ba teng ho latela mehato e latelang: mocheso oa kamore 20 ° C (30min) → -80 ° C (bosiu bo le bong

E ka bolokoa le ho bolokoa ka kotloloho ho Celzer ea sephiri ho -80 ° ° bosiu ebe o fetisetsoa ho naetrojene ea metsi bakeng sa polokelo.

Morero oa bongaka ke karolo e phahameng haholo ho R & D, tlhahiso le thekiso ea lithuso tsa biomedical. Malebela, lipeite, lipolanete tsa pcc, lihlahisoa tse entsoeng ka lihele tsa litle le tse ling tsa likokole tsa likokoana-hloko tsa tlhaho. Yongyue bongaka ba bongaka bo tšoaneloa ke ts'epo le khetho ea hau! Amohela ho Ithuta!